Banca de DEFESA: RÔMULO SARMENTO BARBOSA

Uma banca de DEFESA de MESTRADO foi cadastrada pelo programa.
DISCENTE : RÔMULO SARMENTO BARBOSA
DATA : 15/03/2023
HORA: 10:00
LOCAL: Sala H303, prédio H do Campus Rondon da UFOPA
TÍTULO:

PURIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO BIOLÓGICA DE UM PEPTÍDEO COM ATIVIDADE INSETICIDA DA PEÇONHA DO ESCORPIÃO Rhopalurus amazonicus LOURENÇO 1986 (BUTHIDAE)

PALAVRAS-CHAVES:

Cromatografia, Peptídeos inseticidas, Rhopalurus, ultrafiltração.

PÁGINAS: 52
RESUMO:

A peçonha de escorpião tem sido estudada principalmente por seus peptídeos que atuam em canais iônicos. Há quatro décadas começaram a ser publicados trabalhos sobre a identificação de peptídeos de escorpião que apresentam efeito inseticida. Até agora, peptídeos de atividade anti-insetos foram encontrados em escorpiões do velho mundo e em escorpiões americanos pertencentes aos gêneros Tityus e Centruroides. Do gênero Rhopalurus, há apenas um relato sobre a purificação e caracterização de uma toxina com ação em insetos, isolada de um escorpião de Cuba, R. junceus. No Brasil as espécies de Rhopalurus estão distribuídas nas regiões Norte e Nordeste. Este trabalho teve como objetivo isolar uma toxina peptídica anti-inseto da peçonha de R. amazonicus da região oeste do estado do Pará, Brasil, empregando-se três etapas de purificação guiadas por bioensaio. A peçonha bruta foi solubilizada em acetato de amônio 50 mM pH 5,0, centrifugada a 9500 x g, 8 ºC, durante 10 min e o pellet foi desprezado. A primeira etapa de purificação consistiu da passagem da amostra através de uma membrana de 10 kDa, utilizando uma célula de ultrafiltração Amicon®. O filtrado foi coletado até que nenhum peptídeo pudesse ser detectado por absorbância a 280 nm. Na segunda etapa, o filtrado foi submetido à cromatografia de troca aniônica em coluna Mono-Q, obtendo-se a fração catiônica da amostra. Finalmente, a toxina anti-inseto foi purificada por HPLC de fase reversa em uma coluna Thermo Scientific C18 (4,6 x 250 mm) usando ácido trifluoroacético a 0,12% em água (tampão A) e ácido trifluoroacético a 0,1% em acetonitrila (tampão B). Os picos foram eluídos em gradiente linear de 0 a 60% de tampão B durante 60 minutos com fluxo de 1 ml/min. Foi purificado um peptídeo catiônico, nomeado Ramaz-1, com atividade anti-inseto letal, contra Gryllus assimilis, determinando-se a DL50 1,04 ± 0,26 µg/g (n=3). A análise de espectrometria de massa confirmou a pureza da toxina anti-inseto R. amazonicus com massa molecular de 7909 Da. O presente estudo corrobora a informação, na literatura científica, de que as toxinas de escorpiões menores são relativamente mais potentes que as de escorpiões de maior tamanho corpóreo, visto que essa espécie é considerada de tamanho mediano. Porém, dos escorpiões com peptídeos isolados, esse animal é notoriamente pequeno e possui uma toxina inseticida relativamente mais potente que outras toxinas descritas para escorpiões do novo mundo. Este é o primeiro relato descrevendo o isolamento e caracterização de um peptídeo anti-inseto da peçonha de R. amazonicus.

MEMBROS DA BANCA:
Interno - 1963026 - ANDERSON ALVARENGA DE MOURA MENESES
Presidente - 1684515 - JOACIR STOLARZ DE OLIVEIRA
Externo à Instituição - JUAREZ DE SOUZA - UEPA